Examen microscopique du sédiment urinaire

Standardisation

  • Specimen: première ou deuxième urine du matin
  • Vitesse et durée de centrifugation
    Le temps de centrifugation recommandé pour garantir une sédimentation similaire de tous les échantillons est de 5 minutes.
    La RCF (relative centrifugal force), exprimée en g, c'est-à-dire, la constante d'accélération terrestre) recommandée est de 400 g. Pour convertir cette valeur en nombre de tours par minute (rpm= revolutions per minute) spécifique à une centrifugeuse on utilise la formule suivante:
             RCF = 1.118 x 10 –5 x r / (rpm)2 x g
    r =rayon en cm depuis l'axe de la centrifugeuse jusqu'au fond du tube.
    1.118 x10 –5 = constante de vitesse angulaire
  • préparation du sédiment urinaire pour l'examen microscopique
    Si l'on uitlise un porte-objet et une lamelle en verre, procéder selon les recommandations suivantes pour l'examen et les calculs.
    1. Mesurer précisément le volume nécessaire à la centrifugation après avoir bien mélangé le specimen
    2. Standardiser la centrifugation (durée et vitesse)
    3. Mesurer le volume gardé pour l'examen du sédiment
    4. Mesurer la quantité de colorant ajouté au sédiment
    5. Mesure le volume de sédiment appliqué sur le porte-objet
    6. Utiliser une lamelle standard de (18x18 mm) ou (22x22 mm)
    7. Exprimer les résultats par rapport à un grossissement de 400 x (HPF = High Power Field)
    8. Calculer et rapporter les cellules (érythrocytes et leucocytes) par µL d'urine ou par champ et les autres éléments comme négatifs - ou positifs à +, ++, +++
  • Exemple:
    Volume urinaire 10 mL
    Volume du sédiment gardé pour l'examen microscopique 0.5 mL
    Quantité de solution de coloration ajoutée 20 µL
    Volume du sédiment appliqué sur la lame porte-objet 10 µL
    Lamelle 18 x18 mm
    Microscope: oculaire 10, objectif 40 HPF avec numéro d'oculaire 22 (diamètre du champ = 22 mm/40 = 0.55 mm)
    Dans ce cas l'épaisseur de la couche de liquide est: 10 / (18 x18) = 0.03086 mm
    Le volume par champ à fort grossissement (HPF) est donc: 0.03086 x π x ( 0.55/2 )2 = 0.007328 mm3 ou µL
    En tenant compte de la concentration de l'urine de 20x et de la dilution de 4% par la solution de coloration, un champ (HPF) correspond à 0.141 µL du volume initial.
    Donc, le nombre (n) d'érythrocytes par champ (HPF) est égal à (n) érythrocytes / 0.141 µL d'urine. Etant donné que 1 / 0.141 = 7.1 , on multiplie pour simplifier le nombre d'érythrocytes par un facteur de 7.
    Dans cet exemple: 4 érythrocytes /0.141 µL = 4 érythrocytes x 7 (facteur) = 28 érythrocytes /µL d'urine.
    Nombre Ery

    par champ HPF (0.141 µL)

    		 = Nombre Ery x 7 (facteur) = Nombre Ery
    par µL urine
  • Ces recommandations proviennent des " European Urinalysis Guidelines" ; elles ont été établies par le " European urinalysis group" de l'European Confederation of Laboratory Medicine- ECLM.
  • Attention: Dans certains cas lorsque le volume urinaire de départ est inférieur à 10 ml (petits enfants), il est recommandé de diluer l'urine avec du NaCl physiologique. Les résultats pour les cellules ou les cylindres doivent être corrigés par le facteur de dilution.

Microscopie à fond clair

Le sédiment urinaire est examiné en routine avec un microscope binoculaire à fond clair. Ce type de microscopie est limité à l'identification des érythrocytes, des leucocytes et des cellules épithéliales rénales. Combinée avec la coloration supravitale, la méthode est appropriée comme méthode de dépistage avant la mise en oeuvre de méthodes extensives plus poussées.
On utilise deux grossissements standards:
1. Oculaire 10x et Objectif 10x (LPF =low power field = faible grossisement= 100x) et
2. Oculaire 10x et objectif Objektiv 40x (HPF = high power field = fort grossisement= 400x)

Le nombre de cylindres est estimé au faible grossissement (LPF = 100x) et le nombre d'érythrocytes, de leucocytes et de cellules épithéliales rénales est estimé au fort grossisement (HPF = 400x). Il faut examiner au moins 20 champs au fort grossisement (HPF). Le résultat est établi sur la moyenne des champs examinés.

Lumière polarisée ou à fond noir

La microscopie à lumière polarisée ou en fond noir est basée sur le phénomène optique de l'anisotropie. La lumière traverse les structure isotropes toujours à la même vitesse indépendamment de la direction. Ceci n'est pas le cas pour les structures anisotropes (cristaux, esters de cholestérol): lorsqu'un rayon lumineux pénètre dans un cristal, il se propage dans plusieurs directions avec une vitesse différente, c'est le phénomène de la biréfringence. Les structures biréfringentes présentent l'avantage de pouvoir être idenitifées en lumière polarisée grâce à leur caractéristiques morphologiques typiques. Les esters de cholestérol par exemple ont une forme de croix maltaise.

Microscope à contraste de phase

En comparaison avec la microscopie à fond clair, la microscopie à contraste de phase permet une meilleure visualisation des structures transparentes par une accentuation et une traduction des différences de phase en différences d'amplitude visibles. Le contraste de phase est particulièrement utile pour l'identification des éléments transparents du sédiment et d'autres structures présentant un indice de réfraction. Il est ainsi possible de reconnaître les structures nucléaires des cellules épithéliales rénales, de différencier les érythrocytes glomérulaires et non glomérulaires. La microscopie en contraste de phase est considérée comme plus appropriée pour l'examen du sédiment urinaire que la microscopie à fond clair.